先锋影音亚洲中文字幕av,精品人妻伦一二三区久久,日韩a片无码毛片免费看小说,日产精品一线二线三线芒果

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴增的方法

    消滅 PCR 非特異性擴增的方法

    發(fā)布時間: 2023-06-28  點擊次數(shù): 1206次
    非特異性擴增,即進行 PCR 所擴增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

    消滅 PCR 非特異性擴增的方法:
    1、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體;
     
    2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
     
    3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
     
    4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴增的一個罪魁禍首,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴增;
     
    5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
     
    6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
     
    7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
     
    8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗,加入 DMSO 之后需要同時提高一點退火溫度來補平(qPCR 不太適用);
     
    9、熱啟動法,通過 95℃的高溫熱啟動,高溫解鏈,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


產(chǎn)品中心 Products
欧美后进式猛烈xx00免费视频| 精产国品一二三产区区别在线观看| 夫妻那些事全集免费观看电视剧| 免费a级毛片在线播放| 亚洲一区二区嗯好爽快点| a级毛片无码久久精品免费| 体验区试看120秒啪啪免费| gary大猛男gary2023| 中文字幕 一区二区三区| 又长又粗又大又硬起来了| 小受被用各种姿势进入n视频| 欧美成人a猛片在线播放| 女人被狂c躁到高潮视频免费网站| 夫妻那些事全集免费观看电视剧| 交换玩弄两个美妇教师| 韩国午夜理伦三级在线观看中文版| 免费av在线| 国产无遮挡又黄又爽在线观看| 98国产精品综合一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三区| 亚洲熟妇无码一区二区三区导航| 欧美精产国品一二三区别| 奇米综合四色77777久久麻豆| 全是肉的高h短篇bl| 在线观看免费人成视频| 精东传媒vs天美传媒电影| 超大乳抖乳露双乳喷奶水视频| 我偷偷跟亲妺作爱h在线观看| 少妇高潮惨叫久久久久久| 无码人妻一区二区三区精品视频| 体育生gay白袜调教video| 麻豆免费视频网站入口在线观看| 国产亚洲成av人片在线观黄桃| 精品久久久久久久久久中文字幕| 男生下面伸进女人下面的视频| 人人妻人人藻人人爽欧美一区| 国产乱码精品一区二区三区中文| 日本大尺度床戏做爰3d肉蒲团| 亚洲午夜精品久久久久久app| 中文无码一区二区三区在线观看| 亚洲精品国产一区二区精华液|